Tema: Laboratoriearbete - 5

Hallå hallå,

Idag gjordes många olika saker i labbet. Först, poolade PCR-produkterna från 13 och 17 februari och gjorde en PCR-purification med QIAGENs Quick-Start Protocol och eluerade produkten i 50 µl H2O. Därpå utfördes en DpnI klyvning för att bli av med templatet i PCRreaktionerna. Inkuberade klyvningsreaktionen i 37 grader och värmeinaktiverade enzymet genom att värmebehandla 80 grader i 20 minuter. Eller ja, gjorde det i 25 minuter för att vara exakt, eftersom värmeledningsförmågan från värmeblocket genom luft är låg. Drog över på tiden för att vara säker att en inaktivering verkligen ägt rum. Därefter, en Quebecprep av DY380 stammen med cosmid för att rena fram cosmiden och för att kunna göra en bedömning om cosmiden är en knock-out cosmid via PCR. Avslutningsvis, så förbereddes en 1-molarig NaOH lösning och LB agarplattor med ampicillin och kanamycin.

Imorgon ska en cosmid transformeras in i DY380 för att kunna göra en knock-out cosmid med en gen vi är intresserade av. Dessutom, en dropdialys för att göra bufferten i ett av proven saltlöst så att det också kan transformeras in i DY380. Vid elektroporering är det viktigt att provet är saltlöst.